龙血竭镇痛和阻滞神经传导作用的实验研究

【摘要】
目的观察龙血竭镇痛和阻滞神经传导的药理效应。方法采用热板法、光热辐射甩尾法和冰醋酸扭体法，观察龙血竭的镇痛作用。并在急性分离的牛蛙坐骨神经干上，观察龙血竭对坐骨神经动作电位幅值、不应期和传导速度的影响。结果龙血竭能明显延长小鼠舔足、甩尾的痛阈反应时间，减少醋酸致小鼠扭体次数;牛蛙坐骨神经滴加龙血竭后，神经干动作电位幅值明显下降，不应期延长，传导速度减慢。结论龙血竭具有显著的镇痛作用，并可阻滞神经传导。
【关键词】 龙血竭;镇痛;坐骨神经;传导阻滞
Abstract：ObjectiveTo observe the analgesic effect and block of nerve conduction induced by Dragon's Blood.MethodsIn the hot-plate test，light and hot radiation test on the tail and glacial acetic acid- induced writhing test，the changes of both the latencies of licking paws，the flicking tail and the writhing numbers were observed respectively after administration. In the acute isolated bullfrog sciatic nerve，the amplitude，conductivity and refractory period of the action potential were also observed respectively after administration.ResultsDragon's Blood markedly prolonged the latencies of licking paws and flicking tail,reduced the number of writhing. In the presence of Dragon's Blood，the action potential amplitude of the bullfrog sciatic nerve was decreased，the conduction velocity was slowered and the refractory period was delayed.ConclusionDragon's Blood has prominent analgesic effect and can block the nerve conduction.
Key words： Dragon's blood resin;Analgesic effect;Sciatic nerve;Conduction block
血竭是传统药物中的一味名贵药材，具有行瘀止痛、止血敛疮等功效，有“活血圣药”之称。目前国内使用的血竭称为龙血竭，为百合科植物剑叶龙血树含脂木材的乙醇提取物[1]，现已被广泛应用于临床，并在止血、镇痛方面取得了很好的疗效[2]。为了研究龙血竭产生镇痛效应的药理机制，我们曾应用膜片钳实验技术，观察到浓度为0.5 g/L的龙血竭对与疼痛发生和传导机制关系密切的背根神经节 (dorsal root ganglion， DRG) 细胞河豚毒素敏感型(tetrodotoxin-sensitive，TTX-S) 和河豚毒素不敏感型 (tetrodotoxin-resistant，TTX-R) 钠通道电流具有显著的调制作用[3，4]，从而提出了龙血竭可能通过直接干预痛觉信息的传导过程来发挥其镇痛效应的机理。然而，目前国内对于龙血竭的药理实验研究多集中于其活血化瘀和消炎的功效评价，而评价其镇痛效果的药理实验研究却少有开展。本文采用热辐射法、热板法和扭体实验法，观察龙血竭的镇痛效果，并基于我们所提出的龙血竭干预痛觉信息的传导过程来发挥其镇痛效应的机理，观察龙血竭对牛蛙坐骨神经动作电位的影响，以验证龙血竭产生镇痛效应的药理机制。
1材料与仪器
1.1动物昆明小鼠，雄性，体质量18~22 g;牛蛙，体质量500 g左右，雌雄不限，购自武汉大学医学院实验动物中心。
1.2药品龙血竭，为百合科龙血树属植物剑叶龙血树含脂木材中提取的醇提物，购自广西中医药研究所，由卢文杰教授分离提取和鉴定。将龙血竭用蒸馏水配制成0.5 g/L的龙血竭溶液。冰醋酸为国产分析醇，用蒸馏水配置成浓度为0.6%的冰醋酸溶液。蒸馏水配制任氏液(g/L)：NaCl，6.5;KCl，0.14;CaCl2,0.12;NaHCO3，0.2;KH2PO4，0.01;Glucose，2.0。
1.3仪器YLS-6B智能热板仪，YLS-12A鼠尾光照测痛仪，均购自淮北正华生物仪器设备有限公司。BL-420E生物机能实验系统，神经屏蔽盒，购自四川成都泰盟科技有限公司。
2方法和结果
2.1热板法、光热辐射甩尾法和冰醋酸扭体法使热板仪水浴温度控制在55℃，将昆明小鼠放置在热板上，热刺激小鼠足部产生痛反应，即舔足反应，以小鼠出现舔足的时间作为痛反应指标。选取30 s内出现舔足反应[5]的昆明小鼠10 只，随机分为龙血竭给药组及空白对照组，每组5只，腹腔注射给药，给药容积10 ml/kg，空白对照组给予等容积生理盐水。给药前和给药20 min后，均将两组小鼠放置在热板上，记录每只小鼠的舔足潜伏期。实验数据用±s表示，给药前后舔足潜伏期的比较采用t检验，痛阈提高的百分率(%)=(给药后的痛阈-基础痛阈)/基础痛阈×100%。给予龙血竭的昆明小鼠的舔足潜伏期明显延长。结果见表1。表1龙血竭对小鼠舔足潜伏期(痛阈)的影响用光照测痛仪将一束光照射到鼠尾上产生集热效应，使鼠尾的局部升温产生疼痛，超过动物忍耐的痛阈时，动物将产生有效的甩尾逃避，以小鼠出现甩尾反应的时间作为痛反应指标。选取5 s内出现甩尾反应的昆明小鼠10 只，随机分为龙血竭给药组及空白对照组，每组5只，腹腔注射给药，给药容积10 ml/kg，空白对照组给予等容积生理盐水。给药前和给药20 min后，测定两组小鼠的甩尾潜伏期。实验数据用±s表示，给药前后甩尾潜伏期的比较采用t检验，痛阈提高的百分率(%)=(给药后的痛阈-基础痛阈)/基础痛阈×100%。给予龙血竭的昆明小鼠的甩尾潜伏期明显延长。结果见表2。表2龙血竭对小鼠甩尾潜伏期(痛阈)的影响取昆明小鼠10 只，随机分为龙血竭给药组及空白对照组，每组5只，腹腔注射给药，给药容积10 ml/kg，空白对照组给予等容积生理盐水。给药20 min后，向每只小鼠腹腔注射浓度为0.6%的冰醋酸溶液0.2 ml，之后记录每只小鼠15 min内扭体的次数，以此为痛阈指标。实验数据用±s表示，给药前后小鼠扭体次数的比较采用t检验，抑制率(%)=(空白对照组扭体均数-龙血竭组扭体均数)/空白对照组扭体均数×100%。给予龙血竭的昆明小鼠在15 min内扭体的次数明显减少。见表3。　　表3龙血竭对小鼠冰醋酸致扭体反应的影响
2.2牛蛙坐骨神经动作电位制作牛蛙坐骨神经干标本，置于神经屏蔽盒上，用BL-420E生物机能实验系统记录神经干动作电位，并测量其幅值大小，不应期和传导速度。用波宽0.2 ms，幅值1.0 V的刺激电压引导神经干复合动作电位。不应期采用同样的刺激电压两次连续刺激，以0.05 ms为单位不断缩短两次刺激电压的时间间隔，以第2次动作电位不能引导出来的最大时间间隔为不应期。测定神经干动作电位传导速度，则将两个引导电极的间距设置为2 cm，测量两次动作电位出现的时间差，传导速度=2 cm/时间差。制备牛蛙坐骨神经干标本10个，随机分为龙血竭组和空白对照组，每组5个。将坐骨神经干标本分别置于0.5 g/L龙血竭溶液和等容积的任氏液中，20 min后，记录每个标本的动作电位幅值，不应期和传导速度。实验数据均用±s表示，给药前后动作电位特性的比较采用t检验。给予龙血竭的牛蛙坐骨神经动作电位幅值明显减小，不应期延长，传导速度减慢。结果见表4。表4龙血竭对牛蛙坐骨神经动作电位的影响
3讨论和结论
龙血竭是从百合科龙血树属植物剑叶龙血树含脂木材中提取的多种成分的混合物，可用于外伤出血，溃疡不敛;跌打损伤，瘀血肿痛，以及一切瘀血阻滞之心腹刺痛等证[6]。由于龙血竭所缓解的疼痛多是由炎症、外伤、溃疡等所引起的，其镇痛作用往往与其消炎作用同时出现，致使一些学者曾将龙血竭的镇痛机理简单地归纳为消炎止痛。但是Reanmongkol W等[7]对泰国龙血树(龙血竭基源植物的一种)甲醇部位的药理学研究结果表明，泰国龙血树的甲醇部位虽然具有外周镇痛作用，但却不能改善致炎剂角叉菜胶引起的肿胀。这一实验结果提示我们，龙血竭镇痛作用的药理机制与消炎作用的药理机制也可能并非完全一致。而且，龙血竭在临床应用中也没有表现出明显的解热效果。基于这些，我们猜测龙血竭镇痛效应的药理机制可能与其直接阻断了某处的痛觉信息传导有关，与常用的解热镇痛药的药理机制并不相似。
热板法和光热辐射甩尾法均是评价药物中枢镇痛活性的常用药理实验方法，小鼠扭体法则是评价药物外周镇痛活性的常用药理实验方法[5]。0.5 g/L的龙血竭在热板法和光热辐射甩尾法实验中，能显著延长小鼠的舔足潜伏期和甩尾潜伏期;在小鼠扭体法实验中，则能显著减小15 min内出现扭体反应的次数，说明龙血竭既有良好的中枢镇痛活性，也具有良好的外周镇痛活性。这一实验结果与我们之前的推测相符，龙血竭与常用的解热镇痛药在镇痛机理上并不相似，后一类药物并无中枢镇痛活性。
在以前的实验研究中，我们曾观察到0.5 g/L的龙血竭对初级感觉神经元电压门控性钠通道的调制作用和其对电刺激坐骨神经诱发的脊髓背角广动力范围神经元放电活动的抑制作用[8]，从细胞水平上证实了龙血竭对中枢和外周痛觉信息传导的阻滞效应。龙血竭降低牛蛙坐骨神经动作电位幅值，延长其不应期和减慢其传导速度，这些实验结果均说明龙血竭能够阻滞神经传导，更进一步证实了龙血竭对痛觉信息传导的干预作用。因此，龙血竭的镇痛机理和其消炎作用的机理应有一定的差别，龙血竭阻滞神经传导，干预痛觉信息传递应是其产生镇痛效应的机制之一。
【参考文献】
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[2]陈婷，廖天安.血竭胶囊对拔牙术后止血、镇痛疗效观察[J].海南医学，2002，13(10): 48.

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[7]Reanmongkol W，Subhadhirasakul S，Bouking P.Antinociceptive and antipyretic activities of extracts and fractions from Dracaena loureiri in experimental animals [J].Songklanakarin J Sci Technol，2003，25(4): 467.

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