看散点图说话
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一、检测原理：半导体激光、流式细胞术、核酸染色
激光照射细胞所得到的前向散射光(FSC)、侧向散射光(SSC)、侧向荧光(SFL)，将细胞进行计数和分类。两种散射光(FSC、SSC)反映细胞大小、表面构造、颗粒形状、核形、折射率和反射率等。一般情况下，细胞越大，FSC的信号就越强；细胞内部构造越复杂，SSC的信号也越强。另外，侧向荧光主要反映细胞内核酸和细胞器的种类和多少。针对这3种信号，运用数字技术和演算法，对白细胞、有核红细胞、网织红细胞、血小板进行分类和计数，同时检出异常细胞和动稚细胞。
二、血细胞散点图
① WNR通道
试剂：LysercellWNR（溶血剂），Fluorocell WNR（染色液）
WNR通道中，进行白细胞的计数、并且分类和计数嗜碱性粒细胞和有核红细胞。
Lysercell WNR中的表面活性剂使红细胞溶血的同时，使白细胞膜轻微受损。白细胞的外形和内部构造因各自的细胞特性而异。利用散射光（FSC）可捕捉其形态的差异，凭此将嗜碱性粒细胞和其它的白细胞区别、计数。
Fluorocell WNR对白细胞以及有核红细胞的核酸和细胞器进行荧光染色。在Lysercell WNR中白细胞比有核红细胞，存在的染色部位较多，所以与有核红细胞比，其荧光强度也较强。根据该荧光量的差异，将有核红细胞和其他的白细胞区别、计数。
② WDF通道
试剂：LysercellWDF（溶血剂），FluorocellWDF（染色液）
WDF通道中，对白细胞进行计数并分类为中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞以及嗜酸性粒细胞；同时检出幼稚白细胞以及异型淋巴细胞等的异常细胞。
Lysercell WDF中的表面活性剂使红细胞和血小板溶血、溶解，同时使白细胞的细胞膜轻微受损。白细胞的细胞形态因各自的特征而异，用侧向散射光可区到该差异。
Fluorocell WDF中的荧光染料进入细胞内，对核酸及细胞器染色。由于核酸及细胞器的种类和多少不同，各种白细胞的荧光强度产生差异。通过演算法来对各种白细胞具有的散射光和荧光强度的差异进行分析，对各类细胞进行计数、分类及检出异常细胞并报警。
③ WPC通道
试剂：Lysercell WPC（溶血剂）, Fluorocell WPC（染色液）
XN系列血液分析系统（A系列机型）又引入WPC通道，针对异常细胞进行特异性的区分。在WPC通道中，可检出原始细胞、淋巴细胞系的异常细胞。
WPC通道溶血素试剂中的表面活性剂使红细胞及血小板溶血、溶解，并在白细胞的细胞膜上进行打孔。此后，荧光染料进入细胞内，将核酸等物质进行染色，根据细胞内含核酸量不同、来检出白细胞及异常细胞集团。根据疾病和病例不同，所出现的原始细胞和淋巴细胞系的异常细胞具有的性质也各不相同，它们在对WPC通道Lysercell WPC溶血素试剂中的表面活性剂和Flurocell WPC荧光染料的反应中，会产生形态变化和染色性等与正常细胞不同的各种各样的差异。该反应性的差异，被散射光强度和荧光强度所反映，根据计算法可检测异常细胞和其集团。
④ RET通道
试剂：CELLPACK DFL（稀释剂）,Fluorocell RET（染色液）
RET通道中，Fluoroell RET中的荧光染料对由CELLPACK DFL处理的网织红细胞及白细胞的核酸等进行荧光染色，根据荧光强度的差异来区分成熟红细胞并对网织红纸胞计数和分类，分类。
在RET通道， 使用荧光染料将未成熟红细胞中的大量残存核酸染色，用流式细胞术的原理进行检测。被荧光染色的网织红细胞根据荧光强度的强弱分类为四部分：HFR（高荧光强度网织红细胞比率）、MFR（中荧光强度网织红细胞比率）、LFR（低荧光强度网织红细胞比率）、RBC（红细胞）。
分类为HFR、MFR、LFR的红细胞称为网织红细胞，特别是分类为HFR、MFR的网织红细胞作为IRF（未成熟网织红细胞指数）计数。另外，分类为RBC的红细胞作为成熟红细胞计数。
⑤ PLT-F通道
试剂：CELLPACK DFL（稀释剂）, Fluorocell PLT（染色液）
PLT-F通道中, Fluorocell PLT中的荧光染料对由CELLPACK DFL处理的血小板进行特异性的染色、并且计数。
另外，将荧光强度较强的区域划分为IPF (Immature platelet fraction)。 根据前向散射光和荧光强度的差异，明确地区别血小板和其他的血细胞。
三、临床案例分享
患者男，42岁，因“反复发热一周”入院。血常规结果如下，白细胞及各分类计数显著增高，以单核细胞增高为主，红细胞和血小板降低，镜检可见幼稚单核细胞，结合其他检查初步诊断为急性白血病。下图分别为40×、100×的镜下形态。
WBC Flag(s)：通过比较可以发现，最左侧粉色散点少见-有核红较低；中间蓝色区域荧光亮度明显增强-白细胞数量增多（左图为患者）。左图为患者。
通过比较可以发现，患者白细胞数量及分类显著异常，上方白色区域明显，提示有幼稚细胞。
RBC Flag(s): Anemia贫血 底部增宽，RDW明显增加，红细胞大小不均。
PLT Flag(s): Thrombocytopenia 血小板减少，峰高降低。
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海厦伤寒论笔记（五八）
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