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1、(10)申请公布号 CN 102283862 A (43)申请公布日 2011.12.21 CN 102283862 A *CN102283862A* (21)申请号 201110238360.1 (22)申请日 2011.08.19 A61K 33/20(2006.01) A61P 29/00(2006.01) (71)申请人 南京中医药大学 地址 210046 江苏省南京市栖霞区仙林大学 城仙林大道 138 号 (72)发明人 陆兔林 毛春芹 蔡宝昌 李林 余久霞 陈强 (74)专利代理机构 南京苏高专利商标事务所 ( 普通合伙 ) 32204 代理人 柏尚春 (54) 发明名称 一种紫硇。
2、砂的炮制方法和应用 (57) 摘要 本发明公开了一种紫硇砂的炮制方法, 其特 征在于, 取紫硇砂, 粉碎, 过30-50目筛, 加8-12倍 量水, 煮沸, 过滤, 滤液中加紫硇砂总重量 40-60% 的米醋, 水浴加热, 捞取米醋液面上析出的结晶, 析晶时间为 60-120 分钟, 并收集米醋底部结晶, 合并结晶, 干燥即得, 本发明还公开了一种紫硇砂 在制备抗炎药物中的应用。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 CN 102283870 A1/1 页 2 1. 一种紫硇砂的炮制方法, 其特征在于, 取紫硇砂。
3、, 粉碎, 过 30-50 目筛, 加 8-12 倍量 水, 煮沸, 过滤, 滤液中加紫硇砂总重量 40-60% 的米醋, 水浴加热, 捞取米醋液面上析出的 结晶, 析晶时间为 60-120 分钟, 并收集米醋底部结晶, 合并结晶, 干燥即得。 2.如权利要求1所述一种紫硇砂的炮制方法, 其特征在于, 取紫硇砂, 粉碎, 过40目筛, 加10倍量水, 煮沸, 过滤, 滤液中加紫硇砂总重量50%的米醋, 水浴加热, 捞取米醋液面上析 出的结晶, 析晶时间为 80 分钟, 并收集米醋底部结晶, 合并结晶, 干燥即得。 3. 如权利要求 1 或 2 所述的一种紫硇砂炮制方法, 其特征在于所述的干燥条。
4、件为 : 干 燥温度为 50, 干燥时间为 5 小时, 设备为热风循环烘箱。 4.如权利要求1或2所述的一种紫硇砂的炮制方法制得的紫硇砂在制备抗炎药物中的 应用。 权 利 要 求 书 CN 102283862 A CN 102283870 A1/5 页 3 一种紫硇砂的炮制方法和应用 技术领域 0001 本发明涉及中药炮制领域, 具体涉及一种紫硇砂的炮制方法和应用。 背景技术 0002 硇砂为人工合成的氯化铵结晶体 Sal Ammoniac(白硇砂) 和卤化物类矿物类紫 色石盐晶体Helite Violaceous(紫硇砂) , 首载于 药性论 , 味咸、 苦、 辛, 性温 ; 有毒。 归肝、。
5、 脾、 胃经, 具有消积软坚, 破瘀散结的功效, 临床用于主治内积饱胀, 经闭症、 目翳胬肉, 赘疣 及痈肿疮毒等证, 主要产地为青海、 新疆、 甘肃等地。 硇砂生品有毒, 是 “大温有毒之品, 具腐 蚀作用, 如服量过大使人昏迷” , 炮制可 “杀其毒” , 醋制后能使药物纯净, 并能降低毒性, 同 时借助醋散瘀之性, 增强软坚化瘀、 消癥瘕积块之功。白硇砂主含氯化铵, 紫硇砂主含氯化 钠, 两者主成分的化学性质、 药效、 毒理作用差异较大, 造成了一些地方临床用药混乱, 生品 和炮制品不分的现象, 影响了硇砂的运用和疗效。 0003 目前紫硇砂的炮制方法是取砸碎的紫硇砂, 置盆内加开水溶化。
6、, 除去残渣杂质, 倒 入磁盆内。 另取一锅, 内盛醋水。 再将磁盆放入锅内, 加热蒸发, 捞出盆内硇砂液面析出的白 霜, 置白纸上, 再覆盖白纸一张, 干燥即得 北京市公共卫生局 . 北京市中药饮片切制经验 M. 北京 : 人民卫生出版社 .1960:436.; 湖南卫生厅 . 湖南省中药炮制规范 M. 长沙 : 湖南省科学技术出版社.1983:357; 云南省卫生厅.云南中药饮片炮制规范M.昆明:云 南科技出版社 .1986:357. ; 天津市卫生局 . 中药饮片切制规范 M. 天津 :1975:268.。这 种对于醋制硇砂的品质仅仅只是一些经验判断, 其炮制工艺缺乏严格、 可控的操作规。
7、范, 特 别是客观量化的指标, 目前对紫硇砂多集中于对化学成分的研究, 大都试图从单纯的无机 成分的增加或减少, 来评价工艺的优劣, 并且, 动物试验发现该炮制工艺获得的紫硇砂, 其 药效低、 毒性大, 不利于紫硇砂在医药行业中大规模应用和发展。 发明内容 0004 发明目的 : 鉴于现有炮制工艺获得的紫硇砂的药效低、 毒性大的技术问题, 本发明 的目的在于提供一种新型的紫硇砂炮制方法。 0005 技术方案 : 本发明的目的是通过如下的方案实现的 : 一种紫硇砂的炮制方法, 取紫硇砂, 粉碎, 过30-50目筛, 加8-12倍量水, 煮沸, 过滤, 滤 液中加紫硇砂总重量 40-60% 的米醋。
8、, 水浴加热, 捞取米醋液面上析出的结晶, 析晶时间为 60-120 分钟, 并收集米醋底部结晶, 合并结晶, 干燥即得。 0006 上述一种紫硇砂的炮制方法, 取紫硇砂, 粉碎, 过 40 目筛, 加 10 倍量水, 煮沸, 过 滤, 滤液中加紫硇砂总重量 50% 的米醋, 水浴加热, 捞取米醋液面上析出的结晶, 析晶时间 为 80 分钟, 并收集米醋底部结晶, 合并结晶, 干燥即得。 0007 上述一种紫硇砂炮制方法, 其特征在于所述的干燥条件为 : 干燥温度为 50, 干 燥时间为 5 小时, 设备为热风循环烘箱。 0008 上述一种紫硇砂的炮制方法制得的紫硇砂在制备抗炎药物中的应用。 。
9、说 明 书 CN 102283862 A CN 102283870 A2/5 页 4 0009 有益效果 : 1、 通过本发明的炮制工艺获得的紫硇砂, 其抗炎效果更明显、 毒性更 低。2、 目前紫硇砂的炮制方法, 并无统一、 规范的工艺要求, 其炮制程度完全依靠药工的技 术而定, 质量评价多是依靠外观性状指标, 本发明进行的炮制工艺统一规范, 质量均一, 有 利于保证药物效果。 具体实施方式 0010 以下通过实施例形式, 对本发明的上述内容再作进一步的详细说明, 但不应将此 理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例, 凡基于本发明上述内容所实现的技术均 属于本发明的范围。 0011 1、 。
10、制备实施例 实施例1 : 取紫硇砂100g, 粉碎, 过30目筛, 加8倍量水, 煮沸, 过滤, 滤液中加紫硇砂总 重量 40% 的米醋, 水浴加热, 捞取米醋液面上析出的结晶, 析晶时间为 60 分钟, 并收集米醋 底部结晶, 合并结晶, 干燥即得, 干燥条件为 : 干燥温度为 50, 干燥时间为 5 小时, 设备为 热风循环烘箱。 0012 实施例 2 : 取紫硇砂 100g, 粉碎, 过 40 目筛, 加 10 倍量水, 煮沸, 过滤, 滤液中加紫 硇砂总重量 50% 的米醋, 水浴加热, 捞取米醋液面上析出的结晶, 析晶时间为 80 分钟, 并收 集米醋底部结晶, 合并结晶, 干燥即得。
11、, 干燥条件为 : 干燥温度为 50, 干燥时间为 5 小时, 设备为热风循环烘箱。 0013 实施例 3 : 取紫硇砂 100g, 粉碎, 过 50 目筛, 加 12 倍量水, 煮沸, 过滤, 滤液中加紫 硇砂总重量50%的米醋, 水浴加热, 捞取米醋液面上析出的结晶, 析晶时间为100分钟, 并收 集米醋底部结晶, 合并结晶, 干燥即得, 干燥条件为 : 干燥温度为 50, 干燥时间为 5 小时, 设备为热风循环烘箱。 0014 实施例 4 : 取紫硇砂 100g, 粉碎, 过 40 目筛, 加 10 倍量水, 煮沸, 过滤, 滤液中加紫 硇砂总重量50%的米醋, 水浴加热, 捞取米醋液面。
12、上析出的结晶, 析晶时间为120分钟, 并收 集米醋底部结晶, 合并结晶, 干燥即得, 干燥条件为 : 干燥温度为 50, 干燥时间为 5 小时, 设备为热风循环烘箱。 0015 2、 效果实施例 : 紫硇砂不同炮制品抗炎作用研究 2.1 材料 2.1.1 动物 清洁级 ICR 品系小鼠, 18-22 g, 扬州大学比较医学中心提供, 许可证号 : SCXK(苏) 2007-0001。 0016 2.1.2 药物 紫硇砂生品 (090328) 购自南京市医药公司, 经南京中医药大学中药鉴定教研室鉴定为 正品。 米醋(江苏恒顺醋业公司, 20090119)。 二甲苯 (A.R) , 北京化学试剂。
13、厂, 批号 : 081103。 醋酸地塞米松片, 浙江仙碧制药股份有限公司, 批号 : 090252。 0017 2.1.3 仪器 : Mettler AG285 型电子天平 (瑞士梅特勒 - 托利多集团) ; 超声波清洗机 2200 型 (天津 奥特赛恩斯仪器有限公司) ; 8 mm 打孔器。 0018 2.2 方法 说 明 书 CN 102283862 A CN 102283870 A3/5 页 5 2.2.1 二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验 取18-22 g小鼠40只, 随机分为4组, 每组10只。 分别为生理盐水组 : 给予等体积的生 理盐水 ; 地塞米松组 : 人口服用量为, 一次 12.。
14、5 25mg, 一日 25 100mg, 以每人每日 50mg 计算, 小鼠用量为 50*0.0026=0.13mg/20g 小鼠, 按每公斤计算, 给药剂量为 6.5mg/kg ; 试 验组 : 给予紫硇砂普通炮制品, 按现有技术的方法制备, 即取砸碎的紫硇砂 100g, 置盆内 加开水溶化, 除去残渣杂质, 倒入磁盆内。另取一锅, 内盛醋水。再将磁盆放入锅内, 加热蒸 发, 捞出盆内硇砂液面析出的白霜, 置白纸上, 再覆盖白纸一张, 干燥即得, 干燥条件为 : 干 燥温度为 50, 干燥时间为 5 小时, 设备为热风循环烘箱。给药剂量为 0.2g/kg。试验 组 : 给予本发明紫硇砂炮制品。
15、, 按上述实施例 2 方法制备, 取紫硇砂 100g, 粉碎, 过 40 目筛, 加10倍量水, 煮沸, 过滤, 滤液中加紫硇砂总重量50%的米醋, 水浴加热, 捞取米醋液面上析 出的结晶, 析晶时间为80分钟, 并收集米醋底部结晶, 合并结晶, 干燥即得, 干燥条件为:干 燥温度为 50, 干燥时间为 5 小时, 设备为热风循环烘箱。给药剂量为 0.2g/kg。 0019 各组灌胃给药每天一次, 连续3d, 于最后一次给药30min后, 将二甲苯0.05ml涂于 小鼠右耳两侧。致炎 1 h 后颈椎脱臼处死, 用直径 8 mm 打孔器在左右两耳廓相同部位打孔 取样, 及时称重, 以左右耳片重量。
16、之差为肿胀度, 按下式计算抑制率, 并与对照组进行比较。 0020 肿胀抑制率 (%) =( 对照组肿胀度一给药组肿胀度 ) / 对照组肿胀度 *100% 2.2.2 对小鼠棉球肉芽肿组织增生的影响 取体重 18-22 g 小鼠 60 只, 随机分为 4 组, 每组 15 只。采用吸入乙醚法麻醉, 在每只 鼠的右侧腋窝皮下部用碘酒消毒, 75% 酒精棉球脱碘后, 切 1cm 长小口, 将 10mg 的高压灭菌 棉球烘干后, 从切口处植入皮下, 随即缝合皮肤。 从手术当日开始, 各组小鼠给药如下 : 生理 盐水组 : 给予等体积的生理盐水 ; 地塞米松组 : 给药剂量为 6.5mg/kg ; 试。
17、验组 : 给予紫硇 砂普通炮制品, 按现有技术的方法制备, 即取砸碎的紫硇砂 100g, 置盆内加开水溶化, 除去 残渣杂质, 倒入磁盆内。另取一锅, 内盛醋水。再将磁盆放入锅内, 加热蒸发, 捞出盆内硇砂 液面析出的白霜, 置白纸上, 再覆盖白纸一张, 干燥即得, 干燥条件为 : 干燥温度为 50, 干 燥时间为 5 小时, 设备为热风循环烘箱。给药剂量为 0.2g/kg。试验组 : 给予本发明紫硇 砂炮制品, 按上述实施例 2 方法制备, 即取紫硇砂 100g, 粉碎, 过 40 目筛, 加 10 倍量水, 煮 沸, 过滤, 滤液中加紫硇砂总重量 50% 的米醋, 水浴加热, 捞取米醋液面。
18、上析出的结晶, 析晶 时间为80分钟, 并收集米醋底部结晶, 合并结晶, 干燥即得, 干燥条件为:干燥温度为50, 干燥时间为 5 小时, 设备为热风循环烘箱。给药剂量为 0.2g/kg。 0021 每日给药 1 次, 连续给药 6 天, 第 7 天打开原切口, 将棉球连同周围的结缔组织一 起取出, 剔除脂肪组织, 70 烘干, 称重。将称得的重量减去棉球原重量即得肉芽肿重量。 比较各组肉芽肿重量, 并计算抑制率。 0022 肉芽肿抑制率 (%) =( 空白组肉芽肿干重平均重量给药组肉芽肿干重平均重量 ) / 空白组肉芽肿干重平均重量 * 100% 2.3 结果 2.3.1 对二甲苯所致小鼠耳。
19、廓肿胀的影响 对 40 只小鼠的左右耳片重量差进行组间比较, 采用 t 检验, 结果如表 1 所示。 0023 表 1 紫硇砂不同炮制品对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响 (xs,n=10) 组别剂量双侧耳重量差异 (mg)抑制率 (%) 说 明 书 CN 102283862 A CN 102283870 A4/5 页 6 生理盐水组-13.92.9- 地塞米松组6.5mg/kg6.52.1*53.2 试验组0.2g/kg10.12.7*27.3 试验组0.2g/kg7.51.6*#31.6 *P0.05 与生理盐水组比较, # P0.05 与试验组比较 结果显示, 与生理盐水组比较, 紫硇砂不同。
20、炮制品各组, 在抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿 胀方面即抗炎效果, 与生理盐水组均有显著性差异, 其中试验组的本发明紫硇砂炮制品 抗炎效果好于试验组紫硇砂普通炮制品, 两者比较具有显著性差异。 0024 2.3.2 对小鼠棉球肉芽肿组织增生的影响 对 60 只小鼠的肉芽肿重量值进行组间比较, 采用 t 检验, 结果如表 2 所示。 0025 表 2 紫硇砂不同炮制品对小鼠棉球肉芽肿组织增生的影响 (xs,n=15) 组别剂量肉芽肿重量 (mg)抑制率 (%) 生理盐水组-14.93.4- 地塞米松组6.5mg/kg9.62.9*35.4 试验组0.2g/kg11.91.4*20.0 试验组0.2g/。
21、kg10.21.6*#31.5 *P0.05 与生理盐水组比较, # P0.05 与试验组比较 结果显示, 与生理盐水组比较, 地塞米松组明显减轻小鼠棉球肉芽组织重量, 试验 组、 试验组的紫硇砂炮制品对小鼠棉球肉芽肿组织增生也有抑制作用, 且试验组本发 明紫硇砂炮制品的抑制小鼠棉球肉芽肿组织增生, 即抗炎效果好于试验组紫硇砂普通炮 制品, 两者之间比较有显著性差异。 0026 3. 紫硇砂不同炮制品急性毒性研究 3.1 材料与方法 3.1.1 动物 清洁级 ICR 小鼠, 体重 18-22g, 雌雄各半, 由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供, 许可证 : SCXK(沪) 2007-0005。
22、。 0027 3.1.2 药物 紫硇砂生品 (090328) 购自南京市药材公司, 由南京中医药大学中药鉴定教研室鉴定为 正品。试验组 : 给予紫硇砂炮制品, 按现有技术的方法制备, 即取砸碎的紫硇砂 100g, 置 盆内加开水溶化, 除去残渣杂质, 倒入磁盆内。另取一锅, 内盛醋水。再将磁盆放入锅内, 加热蒸发, 捞出盆内硇砂液面析出的白霜, 置白纸上, 再覆盖白纸一张, 干燥即得, 干燥条件 为 : 干燥温度为 50, 干燥时间为 5 小时, 设备为热风循环烘箱。试验组 : 给予紫硇砂炮 制品, 按上述实施例 2 方法制备, 即取紫硇砂 100g, 粉碎, 过 40 目筛, 加 10 倍量。
23、水, 煮沸, 过 滤, 滤液中加紫硇砂总重量 50% 的米醋, 水浴加热, 捞取米醋液面上析出的结晶, 析晶时间 为80分钟, 并收集米醋底部结晶, 合并结晶, 干燥即得, 干燥条件为:干燥温度为50, 干燥 时间为 5 小时, 设备为热风循环烘箱。米醋 ( 江苏恒顺醋业公司, 20090119)。 0028 3.1.3 方法 将小鼠禁食不禁水 12 小时后, 按雌雄分别随机分为 30 组, 每组 10 只, 雌雄各半。根据 预试验结果, 试验组受试剂量为 6.80, 5.78, 4.92, 4.18, 3.54 g/kg, 试验组受试剂量为 7.44, 6.32, 5.38, 4.56, 3。
24、.88 g/kg, 灌胃给药后, 立刻观察动物的中毒反应及死亡情况, 记 录中毒反应症状及死亡时间, 评价紫硇砂不同炮制品毒性效应及毒性程度, 比较紫硇砂不 说 明 书 CN 102283862 A CN 102283870 A5/5 页 7 同炮制品的毒性作用情况。 0029 3.1.4 统计学方法 将死亡效应计数计量资料及剂量等相关数据料输入 SPSS 11.5 软件, 测得LD50值, 95% 可信限及其他相关毒性参数。 0030 3.2 结果与讨论 3.2.1 毒性作用及结果 小鼠灌胃紫硇砂不同炮制品后, 出现异常反应, 表现为行动缓慢, 静卧不动, 呼吸浅慢, 蜷缩, 继而惊跳, 四。
25、肢抽搐和四肢强直后死亡。 试验组出现异常反应时间明显比试验组 出现时间迟。各组均出现随着给药剂量降低, 死亡时间延长。死亡动物立即尸检, 肉眼观 察, 仅见胃部胀大, 其余各主要脏器未明显变化。 存活小鼠中毒症状减轻, 出现蜷缩, 行动迟 缓, 静卧不动, 6-12 小时左右恢复。使用 SPSS 11.5 软件, 将死亡效应计数资料及剂量依据 输入软件系统, 测定 LD50值及其相关毒性参数, 结果见表 3 表 3 紫硇砂不同炮制品的 LD50 比较 LD50(g/kg)95% 可信区间 (g/kg) 试验组 4.824.32-5.34 试验组 5.364.76-5.81 结果表明试验组本发明。
26、紫硇砂炮制品毒性小于试验组紫硇砂普通炮制品。 0031 3.2.2 死亡发生时间分析 试验组最早出现死亡时间为给药后 40 min, 试验组最早出现死亡时间有所延长, 为给药后 80 min, 说明本发明实施例 2 方法炮制后的紫硇砂炮制品毒性较低。各给药组均 出现随给药剂量降低, 死亡时间延长的现象。Bliss 回归系数 R 均大于 0.9, 表明所用剂量 与毒性效应之间存在明显线性关系, 说明观察获取毒性效应数据可信度符合要求。 0032 3.2.3 LD50值比较 试验组紫硇砂炮制品 LD50为 4.82 g/kg, 试验组紫硇砂炮制品 LD50为 5.36 g/kg, 说明试验组紫硇砂炮制品的毒性要比试验组紫硇砂炮制品的大, 按本发明实施例 2 方 法炮制后的紫硇砂炮制品毒性较低。 说 明 书 CN 102283862 A 。
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